Vitamin Analizlerinin kolay yolu

[xxx]

Son yıllarda gıda ürünleri çeşitli vitaminlerle zenginleştirilmektedir. Bu nedenle gıda üreticileri ile resmi ve özel laboratuvarların, bu ürünlerde doğal ve ilave edilen vitaminleri hızlı ve güvenilir bir biçimde tespit etmeleri gerekmektedir.




Suda çözünen vitaminlerin analizleri için geliştirilen ve uzun yıllardır kullanılan mikrobiyolojik metotlar son derece hassas ve spesifiktir. Vitamin analizleri için mikrobiyolojik metotların yanı sıra, HPLC, LC-MSMS ve diğer kromatografik metotlar da kullanılabilmektedir. Yağda çözünen vitaminlerin analizleri HPLC’de UV detektör ile yapılmaktadır.



Prensip



Mikrobiyolojik vitamin analizlerinin prensibi şu şekilde açıklanabilir: Spesifik mikroorganizmalar spesifik vitaminler varlığında üreyebilmektedir (örneğin, Lactobacillus delbrueckii üreyebilmek için Cyanocobalamin’e (Vitamin B12) ihtiyaç duyar). Bu mikroorganizmalar analiz öncesinde uygun bir besiyerinde üretilmelidir. Spesifik vitamini içermeyen besiyerine inoküle edildiğinde üreyemezler. Eksik olan vitamini içeren bir standart ya da numune ilave edildiğinde mikroorganizma üremeye başlar. Bu üreme besiyerinde bulanıklık olarak gözlemlenir ve bulanıklığın derecesi bir fotometre ile ölçülür.



Geleneksel Mikrobiyoloji



Geleneksel yöntemde hedef mikroorganizma kolonileri önce üretilir ve düzenli ekimler ile muhafaza edilir. Analiz öncesi kültürlerin taze olarak hazırlanması ve besiyerine aktarılmadan önce de mikroorganizma sayılarının düzenlenmesi gerekmektedir. Bunun için de çok fazla zaman ve işgücü gerekmektedir. Kesinlik ve hassasiyet çalışmaları da bu metotların genellikle tatmin edici sonuçlar vermediğini göstermiştir.



Berlin’de bulunan ifp-Institute of Product Quality, kullanıma hazır mikrotiter plate formatında mikrobiyolojik vitamin analiz kitleri geliştirmiştir. Bu ürünler VitaFast® markası ile

R-Biopharm AG tarafından sunulmaktadır.



Mikrotiter plate kuyucukları hedef vitamini metabolize eden spesifik mikroorganizmalar ile kaplıdır. Mikroorganizmalar ve süspansiyonların hazırlanması veya korunması için teknik bir işlem gerekmemektedir. Kuyucuklardaki mikroorganizma sayıları, ilgili hedef vitamin için ayarlanmış ve optimize edilmiştir. Test için kuyucuklara sadece besiyeri, artan konsantrasyonlarda vitamin çözeltisi ve numune ekstraktlarının ilave edilmesi gerekmektedir. Yıkama aşaması yoktur. Bu işlem bittiğinde, kuyucuklar inkübasyona bırakılır ve inkübasyon sonunda ELISA okuyucu ile okunan absorbans değerlerinden vitamin miktarları bulunur. Besiyeri, steril su ve analiz öncesi seri dilüsyonlar ile hazırlanarak kullanılan vitamin standardı kit içeriğinde bulunmaktadır.



VitaFast® mikrotiter plate sistemi mükemmel kullanım ve performans özelliklerine sahiptir. Diğer immunolojik yöntemlerin aksine, bir yıkama işlemi gerekmemektedir. Yüksek kesinlik ve doğruluk özellikleri testi üstün kılmaktadır. Varyasyon katsayısı (CV) %10’un altındadır. Gerçek matrislerin analizlerinde geri kazanım oranları %95 ila %105 arasında değişmektedir. Numunelerde doğal ve ilave edilmiş vitaminlerin analizleri yapılabilir. Numune hazırlama işlemleri de buna göre değişir. İlave edilmiş vitaminlerin ekstraksiyonu için tek bir sıcak ekstraksiyon işlemi genellikle yeterli olmaktadır. Doğal vitaminlerin ekstraksiyonu hidroliz ile (enzimatik) yapılmalıdır.



Mikrotiter plate formatı otomasyona da olanak sağlamaktadır ve otomasyon için yatırım maliyeti görece düşüktür. Geleneksel mikrobiyolojik metotlarla karşılaştırıldığında VitaFast® analizleri için %60-70 daha az zamana gereksinim duyulmaktadır ve sarf malzeme kullanımı 30 kat daha azdır. Kitler, tüm suda eriyen vitaminler ve benzer etki gösteren bileşikler için geliştirilmiştir. Bazı amino asitler (lisin, metiyonin ve sistin) için de kitler mevcuttur.



Not: Gıda ürünlerinin etiketlerinde belirtilen vitamin miktarlarının ürünlerin son kullanma tarihlerine kadar korunması gerekmektedir. Bu nedenle ürünlere genellikle aşırı dozlarda vitamin ilavesi yapılmaktadır. Dolayısıyla, hedef konsantrasyonun üzerinde sonuçlar beklenebilir.



İmmunoaffinity Kolonlar



R-Biopharm vitamin analizleri için VitaFast® mikrotiter plate sistemlerinin yanı sıra HPLC analizlerinde numune hazırlama için immunoaffinity kolonlar da sağlamaktadır. Ürünler arasında EASI-EXTRACT® Vitamin B12 ve yeni geliştirilen EASI-EXTRACT® FOLIC ACID bulunmaktadır. Gıdalarda folik asit konsantrasyonunun düşük olmasından dolayı kompleks numunelerde HPLC ile geleneksel yöntemle folik asit analizi zordur. Ayrıca, pigmentler ve diğer bileşikler kromatogramda folik asit’i maskeleyebilmektedir. EASI-EXTRACT® FOLIC ACID kolonları bu problemleri çözmektedir. Yüksek spesifiklikteki monoklonal antikor teknolojisi ile numunedeki folik asit tutulur ve diğer istenmeyen tüm bileşikler yıkanarak atılır. EASI-EXTRACT® FOLIC ACID kullanılarak hazırlanan ekstraktlar daha saftır ve analiz hassasiyeti artmaktadır. EASI-EXTRACT® FOLIC ACID birçok gıda ürününde ilave edilmiş folik asit analizlerinde valide edilmiş bir metottur. İmmunoaffinity kolon sistemi vitamin tabletleri, vitamin premiksleri, tahıllar, un, bebek maması (toz ve süt), süt tozu ve soya sütü gibi ürünlerde başarı ile kullanılmaktadır.



Vitamin analizleriniz için R-Biopharm’ın sunduğu çözümler:

Mikrobiyolojik Microtiter Plate Testler
HPLC Öncesi İmmunoaffinity kolonlar

VitaFast® Folic Acid
EASI-EXTRACT® Vitamin B12

VitaFast® Vitamin B12 (Cyanocobalamin)
EASI-EXTRACT® FOLIC ACID

VitaFast® Vitamin B7 (Biotin)


VitaFast® Vitamin B3 (Niacin)


VitaFast® Pantothenic Acid


VitaFast® Vitamin B1 (Thiamin)


VitaFast® Vitamin B2 (Riboflavin)


VitaFast® Vitamin B6 (Pyridoxin)


VitaFast® Inositol